EdU細胞增殖檢測試劑盒

2021-10-13

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一、細胞，增殖直接測定DNA合成常用法

直接測定DNA合成是細胞增殖檢測的最準確方法之一，常用檢測法有BrdU檢測和新型EdU檢測。

	BrdU	EdU
原理	BrdU為胸腺嘧啶衍生物，可與胸苷競爭摻入DNA，再用抗BrdU單抗，經ICC染色，顯示增殖細胞。	EdU是一種胸腺嘧啶脫氧核苷類似物，可代替胸苷摻入正在復制的DNA分子中，通過EdU與熒光標記特異性反應快速檢測DNA復制活性。
檢測分子	大	很小，BrdU抗體的1/500
檢測方式	免疫反應	化學反應
影響其他標記	是	否
DNA變性	需要	不需要
實驗時間	過夜	2.5h
檢測敏感度	一般	靈敏
植物細胞檢測	需消化細胞壁，細胞壁消化酶常含雜質，甚至破壞細胞形態表征，降低準確性	無需消化細胞壁即可完成檢測，檢測便捷準確
優缺點	破壞了DNA雙鏈結構，影響了其他染料的結合染色，出現染色彌散，準確性降低	染料易擴散特異性好，不破壞DNA和核的結構，避免樣品損傷，無需抗原抗體反應，可準確反映細胞和組織水平DNA復制活性

BrdU需DNA變性后才能與抗體結合，導致BrdU、Hoechst染色彌散，邊緣模糊不清；EdU邊緣清晰完整，檢測靈敏準確

二、EdU檢測原理

EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2' -脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。EdU上的乙炔基能與熒光標記的小分子疊氮化物探針（如YF488/555/594/647）通過一價銅離子的催化發生共價反應，形成穩定的三唑環，該反應非常迅速，被稱作點擊反應(Click reaction) 。通過點擊反應，新合成的DNA會被相應的熒光探針所標記，運用熒光檢測設備（熒光顯微鏡、流式細胞儀等）檢測到增殖的細胞。

三、EdU檢測應用

細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤、線粒體活性、動物活體注射等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。

EdU應用	詳情
動物活體注射實驗	EdU適用于各種動物活體注射，穩定無副作用，檢測時間可以從幾小時至數十天，也適用于石蠟或冰凍組織切片檢測，完全滿足動物細胞增殖的檢測，是全面分析組織或器官細胞增殖的理想工具。
植物成像實驗	EdU分子小可透過細胞壁，無需DNA變性和抗原抗體反應，可準確檢測植物生長發育分化等性狀的細胞增殖情況，其適用于各種單/雙子葉植物的細胞增殖檢測。
細胞標記示蹤	標記示蹤可直觀了解細胞在體內的分布，還可追蹤其體內的分化轉化及調控機制。EdU能競爭性地滲入正在復制的DNA分子，從而達到標記分裂細胞的目的，簡單快速準確示蹤細胞，示蹤標記時間長達6周，遠勝于BrdU。
DNA損傷修復檢測	代謝活動和環境因素（如紫外線）等能造成人體細胞DNA分子結構的破壞，進而改變細胞閱讀信息和基因編碼的方式。DNA損傷修復須經常運行，快速改正DNA結構的任何錯誤。EdU可快速有效標記，細胞核的熒光強度跟DNA損傷修復活性成正相關。
線粒體活性檢測	線粒體是動物細胞的一種半自主細胞器，具有自身特異的DNA分子。這類環狀雙鏈DNA記載了線粒體的遺傳信息。采用EdU可以同時標記線粒體DNA，結合APH即可實現針對線粒體DNA復制活性的檢測。
病毒增殖活性檢測	病毒DNA復制是病毒增殖的一個重要表現，采用EdU方法可快速檢測病毒DNA的復制活性，并掌握病毒增殖的位點。